PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH
Phương pháp mổ khám thu thập giun từ cá, Phương pháp PCR xác định giống, Phương pháp RFLP xác định loài và các video
Phương pháp mổ khám thu thập giun từ cá:
Sử dụng phương pháp mổ khám toàn diện Skrjabin, (1928): Cá được mổ khám bắt đầu từ lỗ huyệt đến miệng. Sau đó tách riêng các bộ phận nội tạng, từng bộ phận sẽ được tách rời và xem trực tiếp bằng mắt thường hoặc soi dưới kính lúp tìm giun tròn ký sinh.
Phương pháp thuỷ phân bằng enzyme pepsin Jackson, (1981). Đối với những cá phát hiện giun tròn được tiếp tục thuỷ phân phần phi lê cá bằng dung dịch hỗn hợp nước, pepsin và HCl 25%.
Phương pháp PCR xác định giống:
- Mẫu ấu trùng giun tròn được tách chiết DNA bằng kít DNA IQ ™ (Promega, Mỹ).
- Sử dụng cặp đoạn mồi NC5, NC2 dùng trong phản ứng PCR chẩn đoán loài Anisakis.
- Các sản phẩm PCR được điện di trên gel agarose 1,0% và được nhuộm bằng thuốc nhuộm ethidium bromide và đọc kết quả dưới tia UV.
Bảng 1. trình tự đoạn mồi phản ứng PCR
Phương pháp RFLP xác định loài:
Các sản phẩm PCR dương tính với Anisakis sp. được sử dụng để tiến hành định danh loài bằng enzyme cắt giới hạn HinfI và HhaI.
ủ hỗn hợp trong 37oC trong 2 giờ. Sau đó điện di trên gel agarose 2,5% và nhuộm bằng ethidium bromide. Đọc kết quả dưới tia UV. Kết quả được so sánh với bảng kích thước loài
Bảng 2. thành phần phản ứng PCR
Bảng 3. qui trình luân nhiệt của phản ứng PCR
Bảng 4. thành phần phản ứng cắt enzyme
Bảng 5. kết quả kích thước từng loài với từng enzyme
BỆNH DO ẤU TRÙNG GIUN HỌ ANISAKIS
ĂN CÁ HỒI SỐNG, COI CHỪNG NHIỄM GIUN ANISAKIS
